1.实验动物接种 乳鼠对盖他病毒甚为易感。一般采集病死乳猪的脑、肺、肾、扁桃体等组织,制成1:10悬液,反复冻融后离心,取上清液接种于1-2日龄乳鼠脑内,观察死亡情况。同时用已知阳性和阴性血清做中和试验。
2.病毒分离 采集病死乳猪的适宜组织,制备1:10悬液,离心取上清液,接种BHK-21、猪胚肾、猪肾、仓鼠肺或非洲绿猴肾细胞做细胞培养,经1-2d即能看到明显的细胞病变,可判为阳性。如有怀疑,可以盲传2代,无致细胞病变作用即可判为阴性。
3.血清学检验
(1)血凝抑制试验:日本已有市售诊断用试剂盒,可按常规方法做微量血凝抑制试验。试验前待检血清需除去非特异性因素,方法是将血清先用丙酮处理,再用鹅红细胞吸附,最后在56℃灭活30min 。试验过程:抗原与血清混合后在4℃过夜,加0.33%鹅红细胞混合,于37℃作用1h观察结果,血清的血凝滴度(HI)在1:10以上,即判为阳性。
(2)酶联免疫吸附试验:抗原由盖他病毒感染的细胞培养液浓缩和纯化。检测方法按常规进行,检测的敏感性与血凝抑制试验基本一致。